Skip Navigation Links
Skip navigation links
الموقع العربي
Home
publications
Abstracts
Researchs Interest
Important Links
Journal website
Pictures Library
Lists
CV
السيرة الذاتية
الساعات المكتبية
النشاطات
رسالة الدكتوراه
My Courses
مادة الأوليات و اللافقاريات
التلوث و حماية البيئة
مادة البيئة و الفونا السعودية
الصحة المدرسية
فسيولوجيا الحيوان عملي
الحيوان العام
Students Degrees
درجات الطلاب
الواجبات
تقارير الطلاب
المعلم المتميز
التنوع الحيوي للهدبيات في المملكة
Exams
Exams For some courses
التقويم الدراسي

 

O

الدرس العملي لأول :

اختبارات عامة على الكربوهيدرات والدهون والبر وتينات:

 

أولاً: الكربوهيدرات :

تشمل الكربوهيدرات عدداً كبيراً من المركبات التي توجد في الطبيعة ويدخل في بنائها ثلاثة عناصر أساسية هي الكربون والهيدروجين والأوكسجين . وأن النسبة بين الهيدروجين والأكسجين هي 1:2 كنسبة وجودهما في الماء , ومن هنا جاءت التسمية مركبات الكربون المائية ( كربوهيدرات ) , ولكن لهذه القاعدة بعض الشواذ فهناك مركبات مثل الفورمالدهيد , و حامض الخليك وحامض اللاكتيك والتي يوجد فيها الهيدروجين والأكسجين بنسبة 1:2 مع وجود الكربون ولكنها لاتدخل تحت الكربوهيدرات , كما أن هناك بعض المركبات الكربوهيدراتية مثل السكرDeoxyribose لايوجد فيها الهيدروجين والأكسجين بنسبة 1:2 .

والمواد الكربوهيدراتية من المركبات الحيوية التي توجد في المواد الغذائية ولاتوجد خلية حية سواءً حيوانية أو نباتية خالية من الكربوهيدرات وإن كان محتوى الخلايا منها يختلف في الكمية والنوع .

وتشمل المواد الكربوهيدراتية الآتي :

1- السكريات: وهي على درجة عالية من الأهمية من الناحية الغذائية.

2- النشويات: وهي تمثل أكبر كمية من الكربوهيدرات في النباتات وتعمل كمصدر للجلكوز .

3- السليلوز: وهي المكون الرئيسي في جدار الخلية النباتية .

 

تصنيف الكربوهيدرات :

 

1- سكريات أحادية : وهي أبسط أنواع الكربوهيدرات والرمز العام لها ( في حالة السكريات السداسية المهمة من الوجهة الغذائية ) هو {C6H12O6} ومنها الجلكوز , الفركتوز , الجالاكتوز .

2- سكريات ثنائية :   وهي ناتجة عن إتحاد جزئين من السكريات الأحادية السداسية والرمز العام لها {C12H22O11} وأهمها السكروز (سكر القصب) , المالتوز(سكر الشعير) واللاكتوز (سكر اللبن).

 

3- السكريات المتعددة : وتشمل السكريات التي تنشأ من(3-10) وحدات من السكريات الأحادية وكمياتها في الطبيعة قليلة , وأهمها السكريات الثلاثية

 

4- السكريات العديدة : وهي ناتجة من إتحاد عدد كبير مـــن جـــزيئات السكريات الأحادية وأهمها النشا والجلايكوجين.

 

الأهمية البيولوجية للجلكوز والكربوهيدرات في الكائن الحي :

يدخل الجلكوز في العديد من العمليات البيولوجية التي تؤدي إلى إنتاج الطاقة اللازمة لضمان استمرار الحياة , وكذلك قيام الخلية بوظائفها , كما أنه قد يستخدم في تخليق أنواع أخرى من السكريات الأحادية كالفركتوز والجالاكتوز  والجلكوز يتم تخزينه في النباتات على هيئة نشا وفي الحيوانات على هيئة جلايكوجين في العضلات والكبد . والمخزون في الكبد يمكن أن يكون مصدراً للجلكوز لجميع أنسجة وأعضاء الجسم عند الحاجة , أما المخزون في العضلات الهيكلية يتم هدمه إلى مرحلة حمض البيروفيك الذي يتحول إلى حمض اللاكتيك الذي يتحرر في الدم ليصل إلى الكبد وهناك يمكن أن يتحول إلى جلكوز الذي قد يخزن على هيئة جلايكوجين أو قد يتحرر في الدم لتغذية بقية أنسجة وأعضاء الجسم .

 

الخواص الفيزيائية العامة :

1-  جـــميع الكربوهيدرات مـــركبات حلقية وتتكسر بالتسخين .

2-  جميعها تذوب في الماء ماعدا السكريات العديدة فهي شحيحة الذوبان في الماء.

3-  جميعها لاتذوب في الايثر .

 

 

 

 

 

 

التفاعلات العامة للكربوهيدرات :-

التجارب العملية :-

 

1-اختبار مولش :Molisch Test

من أهم التفاعلات لجميع الكربوهيدرات  والمجموعات السكرية في مركبات معقده مثل البروتينات السكرية , واللبيدات السكرية وهو   يستخدم للكشف عن وجودها .

 

طريقة إجراء التجربة :-

1- ضع 2 مل من محلول الجلكوز 2% في أنبوبة اختبار جافه.

2- أضف إليها 3-4 قطرات من محلول α- نافثول , ثم رج الأنبوبة لمزج هذه المواد.

3- ثم أضف بحذر وعلى جدار الأنبوبة حوالي 2 مل من حامض الكبريتيك

المركز بحيث تتكون طبقه منفصلة عن محلول الجلكوز.

 

المشاهدة والإستنتاج :-

................................................................................................................................................................................................................................................................................................

 

2- اختبار فهلنج : Fehling Test

ويستخدم للكشف عن خاصية الاختزال للسكريات الأحادية الألدهيدية والكيتونية ، ويتلخص اختبار فهلنج في إمكانية اختزال السكريات الأحادية (أوالثنائية المختزلة) لأيون النحاس في وسط قلوي.

 

طريقة إجراء التجربة :-

1- ضع 2 مل من  محلول الجلكوز 2% في أنبوبة اختبار جافه .

2- أضف إليها 2 مل من كاشف فهلنج . ثم رج الأنبوبة .

3-  ضع الأنبوبة في حمام مائي عند درجة الغليان لبضع دقائق.

 

المشاهدة والاستنتاج:-

................................................................................................................................................................................................

 

3- اختبار بندكت :- Bct enediTest

هذا الاختبار أشد حساسية من تفاعل فهلنج , ويفضل اختباربندكت على فهلنج إذا كان المحلول السكري منخفض التركيز كما في حالة الكشف عن وجود السكر في البول .

 

طريقة إجراء التجربة :-

1- ضع 5 مل من محلول بندكت في أنبوبة اختبار.

2- ثم أضف إليها 1 مل من محلول الجلكوز 2% .

3- رج الأنبوبة ثم ضعها في حمام مائي لبضع دقائق (عند درجة الغليان)

 

المشاهدة والاستنتاج :-

................................................................................................................................................................................................................................................................................................

 

4-  اختبار بارفويد :- Barfoed Test

يميز هذا التفاعل بين السكريات الأحادية والسكريات الثنائية , وهو يعتمد على قدرة السكريات على الإختزال .

 

طريقة إجراء التجربة:-

1- ضع في كل من أنبوبتي إختبار 3 مل من كاشف بارفويد .

2- أضف إلى إحداهما 1 مل من محلول الجلكوز 2% , وإلى الثانية 1مل من محلول أحد السكريات الثنائية المختزلة .ثم رج محتوياتهما.

3-  ضع الأنبوبتين في حمام مائي يغلي

 

المشاهدة والاستنتاج :

........................................................................................................................................................................................................................................................................................................................

 

........................................................................................................................................................................................................................................................................................................................

 

 

 

 


 

5- اختبار اليود:- Iodine Test

هذا الاختبار خاص بالنشا ولكنه سلبي مع السكريات الثنائية والأحادية.

 

طريقة إجراء التجربة:-

1- ضع 2 مل من محلول النشاء في أنبوبة احتبار.

 

 

2- ثم أضف إليها 1 مل من محلول اليود المحضر .

 

المشاهدة والاستنتاج:-

................................................................................................................................................................................................................................................................................................

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

الدرس العملي الثاني

 

ثانياً: البر وتينات:-

البر وتينات عبارة عن جزيئات ضخمة تتركب من وحدات بنائية كبيرة تسمى الببتيدات، والببتيدات بدورها تتركب من وحدات بنائية صغيرة تسمى الأحماض الأمينية. لذلك فإن دراسة البروتينات تستوجب معرفة التركيب البنائي وخصائص كل من الأحماض الأمينية والببتيدات.

 

الأحماض الأمينية: AminoAsid

تسمى الأحمـــاض الأمينية الطبيعيــة بالأحمــاض ألفــا أمينية    ( α –AminoAcid)لأن مجموعة الأمين ( (-NH2  تقع في موقع (   α  )  بالنسبة لمجموعة الكاربوكسيل الحمضية المجاورة . ومن مميزات الأحماض الأمينية أن ذرة الكربون (   α  ) ترتبط أيضاً بذرة هيدروجين.

 

α

 

α

 

 


 

COOH                                                                   CH -- R

NH2

 

proline

NH2

proline

 

 


 

                                                      الصيغة العامة للأحماض ألفا – أمينية

 

أهم مصادر الأحماض الأمينية هو تحلل البر وتينات، إلا أنه يمكن تحضيرها في المختبر.

الببتيدات:-

تنتج من تفاعل المجموعة الأمينية لأحد جزيئات الأحماض الأمينية مع المجموعة الكاربوكسيلية لحامض أميني آخر(في موضع) حيث ينشأ رابطة من كل مجموعة كربونيل ومجموعة أمين تسمى الرابطة الببتيدية.

الببتيدات الناتجة تكون ثنائية أو ثلاثية....الخ تبعاً لعدد الأحماض الأمينية المكونة للببتيد. وعندما يصل عدد الحموض الأمينية عشرة فأكثر تسمى حينئذ" بالببتيدات العديدة "وقد يصل الوزن الجزيئ للببتيدات إلى عشرة آلاف.

 

 

 

R   O  H       O      R                            

NH2-CH-C-N-CH-C-N-CH-COOH           

R        H                                

رابطة ببتيدية

رابطة ببتيدية

 

 

 


 

تجارب التعرف على البر وتينات والأحماض الأمينية:

 

1- تفاعل الننهيدرين: Ninhydrin Reaction

يعتبر إجراء هذا التفاعل أحد التفاعلات الحساسة والدقيقة الخاصة بالكشف عن وجود المجوعة الأمينية في موقع (  α ) سواء كانت في الأحماض الأمينية الحرة أو في البر وتينات والببتيدات.

 

طريقة  إجراء التجربة :

1- خذ أنبوبتي اختبار، ضع في الأولى 2مل من محلول البروتين وضع في الثانية 2مل من محلول التايروزين tyrosine ( أحد الأحماض الأمينية المحتوية على حلقة بنزين )

2- أضف لكل أنبوبة 10 قطرات ( 0.5 مل ) من محلول الننهيدرين وسخن المزيج لمدة دقيقة.

 

المشاهدة والاستنتاج :-

................................................................................................................................................................................................................................................................................................

 

2- تفاعل هيلر Heller Reaction

 

طريقة  إجراء التجربة :

1-  خذ 1مل من محلول بروتين البيض .

2-أضف إليه 0.5 مل من حمض الكبريتيك المركز على جدار الأنبوبة

 

المشاهدة والاستنتاج :-

....................................................................................................................................................................................................................................................................................

 

 

3- تفاعل بيوريت Buret Reaction

وهو تفاعل لوني لجميع البر وتينات. لكنه سلبي مع الأحماض الأمينية الحرة لذلك يستخدم لمعرفة وجود البروتين في محلول ما.

المواد المستخدمة: أ- محلول بروتين البيض  ب- محلول هيدروكسيد الصوديوم 10%   ج-  محلول كبريتات النحاس 2%

 

طريقة  إجراء التجربة :

1- توضع في أنبوبة اختبار 2مل من محلول بروتين البيض وضع في أنبوبة اختبار ثانية 2مل من الماء المقطر.

2- أضف لكل من الأنبوبتين 1مل من محلول هيدروكسيد الصوديوم و 5-8 قطرات من محلول كبريتات النحاس.

3- رج الأنبوبتين وقارن بين لونيهما.

 

المشاهدة والاستنتاج :-

.......................................................................................................................................................................................................................................................................................


تفاعلات ترسيب البر وتينات:

يطلق على البر وتينات التي تذوب في الماء ومحاليل الأملاح المنخفضة والمعتدلة التركيز اسم الأ لبيومينات  (Albumines)  ومثال ذلك زلال البيض .

وهذه الألبيومينات لا تذوب في المحاليل المشبعة من كبريتات الأمونيوم والأملاح الأخرى.

وتعرف الجلوبيولينات Globuline    بأنها بروتينات لا تذوب في الماء ولكنها تذوب في محاليل الأملاح منخفضة التركيز ( تركيزها 2جم / 100 مل ) ولا تذوب في محاليل الأملاح المركزة ( تركيزها 12- 60جم / 100 مل )

تعتبر كبريتات الأمونيوم  (NH4)2SO4  من أكثر الأملاح استخداما لأغراض ترسيب البر وتينات ولكن يمكن استخدام كبريتات المغنيسيوم وكلوريد الصوديوم وغيرها أيضاً.

 

1-الترسيب باستخدام كبريتات الأمونيوم:-

 

طريقة  إجراء التجربة :

1-  ضع في أنبوبة اختبار 3مل من محلول البوتين

2-  أضف إلى الأنبوبة 3مل من محلول كبريتات الأمونيوم المشبع

3-  رج الأنبوبة ثم أتركها لمدة خمس دقائق. ماذا تشاهد ؟

.................................................................................................

.................................................................................................

4- رشح بالترويق. خذ الرشح في أنبوبة اختبار جديدة وأضف إليه مسحوق كبريتات الأمونيوم الناعمة تدريجياً ورج بعد كل إضافة حتى تحصل على محلول مشبع.

5-  أترك الأنبوبة فترة من الزمن. ماذا تشاهد ؟

..................................................................................................

.................................................................................................

تلاحظ ظهور عكارة لا تلبث أن تترسب في قعر الأنبوبة وهذا الراسب الأخير من الألبيومينات. أفصل الراسب بالترويق وللتأكد من خلوه من البروتين أجر علية تجربة البيوريت حيث يكون التفاعل سلبياً

 

2- الترسيب باستخدام كبريتات الماغنسيوم وكلوريد الصوديوم:

 

طريقة  إجراء التجربة :

1-  خذ أنبوبتي اختبار وضع في كل واحدة منها 3مل من محلول البروتين

2-  أضف إلى الأنبوبة الأولى مسحوق كلوريد الصوديوم تدريجياً حتى يصبح المحلول مشبعاً

3-  أضف إلى الأنبوبة الثانية مسحوق كبريتات الماغنسيوم تدريجياً حتى يصبح المحلول مشبعاً

4-  أترك الأنبوبة لمدة 5-10 دقائق . ماذا تشاهد ؟

تشاهد حدوث راسب في كل من الأنبوبتين .ويعزى ذلك إلى وجود .........................لأن ....................... لا تترسب في محاليل الأملاح المتعادلة ( المحاليل درجة حموضتها 7 = PH )

5- رشح محتويات الأنبوبتين بالترويق ثم خذ جزءً من كل رشيح وأضف إليه محلول حامض الخليك حتى يصبح الوسط حامضياً تشاهد ظهور راسب يدل هذا الراسب على وجود...................

 

 

تمرين :

 

1- أشرح كيف يمكنك التمييز عملياً بين زجاجة تحتوي على بروتين وأخرى على حامض أميني بتجربة معملية فمت بها.

2-  أشرح عملياً كيف تميز بين الجلوبيولينات والألبيومينات

3- صِّف طريقة إجراء اختبار بيوريت.

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

الدرس العملي الثالث

 

تابع تفاعلات ترسيب البروتين:

3- الترسيب بواسطة المذيبات العضوية:

ينبغي لترسيب البروتين بواسطة المذيبات العضوية أن تكون في وسط ضعيف الحامضة أو متعادل.

 

طريقة  إجراء التجربة :

1-  ضع 2مل من محلول بروتين البيض في أنبوبة اختبار.

2-  أضف إليه قليلا من كالوريد الصوديوم ثم رج جيداً حتى يذوب

3- أضف 5مل من الكحول الإيثيلي على شكل قطرات ثم رج بقوة ثم أترك الأنبوبة بعد ذلك.ماذا تشاهد ؟

...............................................................................................

 

4- بعد 8 دقائق خذ جزء من المحلول أعلاه وأضف إليه بضع ملميترات من الماء المقطر ليتناقص تركيز المحلول.  ماذا تشاهد ؟

...............................................................................................

 

 

4- الترسيب بواسطة الأحماض المعدنية:

تقوم الأحماض المعدنية المركزة مثل الهيدروكلوريك والنتريك والكبريتيك بنزع الماء المحيط بجزيئات البوتين ومعادلة ما تحمل من شحنات فتتكون مركبات معقدة ويؤدي ذلك إلى تغيير طبيعة البروتين وبالتالي تكون رواسب لا تعود للذوبان في الماء ثانية .

 

طريقة  إجراء التجربة :

1-  ضع في ثلاث أنابيب اختبار 2مل من محلول البروتين.

2- أضف 1مل من حامض الهيدروكلوريك المركز إلى الأنبوبة الأولى، و1مل من حامض النتريك المركز إلى الأنبوبة الثانية، و1مل من حامض الكبريتيك المركز إلى الأنبوبة الثالثة على أن يتم ذلك بهدوء بحيث يسيل الحامض على جدران الأنابيب الثلاثة.

3-  اترك الأنابيب الثلاثة فترة من الزمن. اكتب ما تشاهده ؟

..................................................................................................
..................................................................................................

4-  رج الأنابيب الثلاثة بحذر. ثم أضف إلى كل منها مزيداً من الحامض الذي بها ماذا تشاهد ؟

..................................................................................................
..................................................................................................


5- الترسيب بواسطة الأحماض العضوية:

 

طريقة إجراء التجربة:

ضع 2مل من محلول بروتين البيض في أنبوبة اختبار ثم أضف 5-10 قطرات من محلول حامض ثلاثي كلوروأستيك. ماذا تشاهد؟

................................................................................................

 

6- الترسيب بواسطة أملاح المعادن الثقيلة:

 

طريقة إجراء التجربة:

1-  ضع 2مل من محلول بروتين البيض في كل من ثلاث أنابيب اختبار

2- أضف إليها تدريجياً بضع قطرات من محاليل خلات الرصاص وكبريتات النحاس ونترات الفضة حتى يظهر راسب.

3-  بعد ظهور الراسب يضاف إلى كل أنبوبة مزيداً من محلول الملح الذي بها.

ماذا تشاهد ؟

..................................................................................................
..................................................................................................

 

7- الترسيب بواسطة الحرارة:

تتعرض البر وتينات للتخثر عند درجة 50 م فصاعداً، مما يؤدي إلى تغيير طبيعة البروتين. إذ إن التسخين يعمل على تحطيم الروابط الكبريتد و الروابط الهيدروجينية بين السلاسل البروتينية وبالتالي يتغير الشكر الفراغي لجزيئات البروتين.

 

طريقة إجراء التجربة:

1-  ضع 2مل من محلول بروتين البيض في كل من خمسة  أنابيب اختبار.

2- الأنبوبة الأولى: تسخين حتى الغليان .ماذا تلاحظ ؟ ………………………………………………………..............

 

3- الأنبوبة الثانية: يضاف إليهــا قطرة واحدة من محلول حامض الخليك 1% ثم تسخين . ماذا تلاحظ؟ ........................................................................................

 

4- الأنبوبة الثالثة: يضــاف إليهـــا 8 قطــرات مــن محلــول حامض                                          الخــليك  10% وتسخين حتى الغليان. ماذا تلاحظ؟
........................................................................................

 

5- الأنبوبة الرابعة: يضاف إليها 8قطرات من محلول هيدروكسيد الصوديوم 10% وتسخين حتى الغليان.ماذا تلاحظ؟
........................................................................................

 

6- الأنبوبة الخامسة: يضاف إليها 5 قطرات من محلول حامض الخليك 10% و5 قطرات من محلول كلوريد الصوديوم المشبع ,وتسخين فوق اللهب حتى الغليان . ماذا تلاحظ؟
........................................................................................

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

تحضير الكواشف اللازمة:

 

1- محلول بروتين البيض: ( الأليبومين )

أفصل بياض بيضة دجاجة عن الصفار ثم أذب البياض في 100 مل ماء مقطر رشح المحلول خلال قطعة من الشاش مطوية 3-4 طيات، احتفظ بالمحلول الناتج في الثلاجة لحين الإستعمال.

2- محلول البيومينات الحليب:

خذ 200 مل من الحليب الطازج وأضف إليها 200 مل من محلول كبريتات الأمونيوم المشبع رج الخليط جيداً وأتركه لمدة 10-15دقيقة رشح المزيج باستخدام ورق ترشيح عادي يحتوي الرشيح على الألبيومينات

3- تحضير محاليل الأحماض الأمينية:

أذب 1جم من كل من الأحماض الأمينية التالية في 100 مل ماء مقطر وأحتفظ بهذه المحاليل في الثلاجة.

أ) التايروزين ( Tyrosine)   ممثلاً للأحماض الأمينية المحتوية على حلقة بنزين

ب) التربتوفان (Tryptophane)   للأحماض الأمينية المحتوية على مجموعة الأندول

4-  محلول الننهيدرين 0.25% تركيز:

أذب0.25% جم من الننهيدرين 100 مل ماء أو 120 مل إيثانول مطلق ثم رج للتجانس .

5- محلول كبريتات النحاس 2%:

أذب 5 جم من كبريتات النحاس المائية (CuSO4H2O)  في 250 مل ماء مقطر ثم رج المحلول للنحاس.

6- محلول هيدروكسيد الصوديوم 10%:

أذب 25جم من هيدروكسيد الصوديوم ( NaOH)  في 250 مل ماء مقطر ، رج للتجانس.

7- محلول كبريتات الأمونيوم المشبع:

أذب 80 جم من كبريتات الأمونيوم الصلبة في 100 مل ماء مقطر ثم رج المحلول للتجانس.

 

 

 

 

الدرس العملي الرابع

 

الدهون Lipids

يطلق مصطلح الدهون على مجموعات متباينة من المركبات تشمل:

 

1-الدهون البسيطة Simple Lipids  :

وهي إسترات للأحماض الدهنية مع الجليسرول وتعرف بالجليــسريدات الثــلاثة Triglycerides  أو الدهون  المتعادلة ويطلق مصطلح الزيوت على المواد الدهنية التي تكون سائلة عند درجة حرارة الغرفة.

 

2-الدهون الفسفورية Phospholipides  :

ومنها مركب الليثين Lecithin والسيفالين Cephalin وهذه عند تحللها مائياً أو إنزيمياً تعطي أحماض دهنية + كحول

 

3-سوبرسيدات Ceyebrosides :

وهذه دهون مركبة لا تحتوي على الفوسفات ولكنها تحتوي على أحماض دهنية + كحول + سكر.

 

4- الدهون المشتقة Lipds Derived:

وتشمل الأحماض الدهنية ، الكولسترول الصابون والفيتامينات التي تذوب في الدهون (K , D , E , A ) .

 

اختبارات الدهون البسيطة Test for Simple Lipids  :

 

1-الصفات الطبيعية

وهذه تشمل وصف اللون، حالة الدهن ( سائل أم صلب )، اللزوجة, درجة الذوبان في الماء، الذوبان في المذيبات العضوية مثل البنزين – الأسيتون – الكحول والكلوروفورم.

 

 

 

 

 

أ- اختبار درجة الذوبان:

طريقة إجراء التجربة:-

1- ضع ثماني أنابيب اختبار على حامل ذي صفين في كل صف أربعة أنابيب وضع في كل من أنابيب الصف الأول قطرة زيت وفي كل من أنابيب الصف الثاني قطعة دهن أو شحم.

2-ضع في الأنبوبة الأولى من كل صف 2مل ماء مقطر وفي الأنبوبة الثانية من كل صف 2مل من الأيثر وفي الأنبوبة الثالثة من كل صف 2مل من الأسيتون وفي الأنبوبة الرابعة من كل صف 2مل من الكحول الأيثيلي.


الشاهدة والإستنتاج:-

................................................................................................................................................................................................

 

ب - الاختبارات الكيميائية Chemical Test:

تفاعل الأكرولين Acrolei Test:

يستخدم هذا التفاعل للكشف عن وجود الجلسرول قي الجلسريدات الثلاثية، ويتم التفاعل بتسخين الجلسرول مباشرة فوق اللهب مع كبريتات البوتاسيوم الحامضية KHSO4 كبريتات الصوديوم NaHSO4 فيؤدي هذا إلى نزع جزيئين من الماء من جزيئ من الجـلسرول ويتكون مركب يعرف باسم الأكرولين الذي يمكن تمييزه من رائحته النفاذة وأبخـرته البيضاء.

 

طريقة إجراء التجربة:-

ضع في أنبوبة اختبار عدة قطرات من الزيت أو الجلسرول النار أو قطعة دهن. ثم أضف إليها كمية قليلة من مسحوق كبريتات البوتاسيوم أو الصوديوم الحامضية الجافة، وسخن الأنبوبة على النار بلطف حذر.

 

الشاهدة والاستنتاج:-

................................................................................................................................................................................................

CH2OH                                  CH

CHOH + 2 KHSO4                       CH  + 2 KOH + 2H2SO4

CH2OH                                  CHO

CH2OH                                  CH

CHOH + 2 KHSO4                       CH  + 2 KOH + 2H2SO4

CH2OH                                  CHO

 

 

 


 

الدرس العملي الخامس

 

الإنزيمات: - Enzymes

يتحلل النشا بواسطة إنزيم الاميليز الموجود بالعصارة اللعابية والعصارة البنكرياسية ليعطي خليط من دكسترينات ومالتوز . وتختلف هذه النواتج في سلوكها تجاه محلول اليود, فالنشا يعطي لون ازرق مع اليود أما الدكسترينات فتعطي ألوان مختلفة بين البنفسجي والأصفر والأحمر. أما المالتوز يتحلل إلى جزيئين من الجلوكوز بتأثير إنزيم المالتيز ولمعرفة الخواص الاختزالية للسكاكر يجري اختبار فهلنج أو بندكت .

 

طريقة إجراء التجربة:-

1-  ضع في كل من أنبوبتي اختبار 1 مل من اللعاب المخفف .

2- اغل الأنبوب الأولى مدة ثلاث دقائق, ثم أضف لكل من الأنبوبتين 1 مل من محلول النشا المخفف ( 1% ) , ثم اتركها لمدة عشرة دقائق في حمام مائي درجة حرارته 37 – 38ْْْْْْم .

3-  قم بإجراء تفاعل اليود واختبار فهلنج على كل من الأنبوبتين.

 

الشاهدة والاستنتاج:-

................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................

 

تأثير تركيز أيون الهيدروجين على فعالية الإنزيم: -

توجد لكل إنزيم درجة مثلى من تركيز أيون الهيدروجين (PH) فيها يظهر أعلى نشاط له – فمثلاً الدرجة المثلى من تركيز أيون الهيدروجين الإنزيم الببسين هي 1.5 – 2.5 ولإنزيم الاميليز اللعاب 6.8 – 7  وللتربسين البنكرياسي 7.8.

 

طريقة إجراء التجربة:-

1- ضع في خمسة أنابيب اختبار الأحجام المذكورة أسفل من محلول فوسفات الصوديوم الحامضية ومحلول حامض الستريك لكي تحصل على محاليل قيمة تركيز ايون الهيدروجين تقع بين 5.6 – 8 .

رقم أنبوبة الاختبار

حجم محلول حامض الستريك

حجم محلول فوسفات الصوديوم

قيمة PH للمخلوط

1

0.42

0.58

5.6

2

0.31

0.69

6.4

3

0.13

0.87

7.2

4

0.06

0.94

7.6

5

0.03

0.97

8.0

 

2- أضف لكل أنبوبة 10 قطرات من محلول اللعاب المخفف   ( 1% ) ثم رج محتويات كل أنبوبة جيداً.

3-  أضف من (3ـــ 5) قطرات من النشا المخفف لكل أنبوبة.

4- ضع الأنابيب الخمسة لمدة عشرة دقائق في حمام مائي درجة حرارته 37 م , ثم اخرج الأنابيب وبردها بسرعة . ثم أضف إلى كل منها قطرة من محلول اليود ورج المحلول جيدا.


الشاهدة والاستنتاج:-

 

............................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................

 

 

 

 

 

 

الدرس العملي السادس

 

سادساً الدم:- Blood

1- موانع التجلط :- Anhcoagulants

يستخدم الهيبارين بكميات صغيرة جداً لمنع تجلط الدم وأيضا من الممكن استخدام اوكسالات الصوديوم ( 0.1 مولاري )0.1 M sodium oxalate أو أكسالات البوتاسيوم   (0.1 مولاري) 0.1 M potassium oxalate  وذلك بنسبة 1 مل لكل 9 مل من الدم و يحضر اكسالات الصوديوم بإذابة 1.34 جم من اكسالات الصوديوم في 100 مل ماء مقطر.

 

2- الحصول على الدم :-

يتم الحصول على عينات الدم غالبا بواسطة محاقن ( سرنجا بلاستيكية بها قسط من الهيبارين أو أي مادة اخرى مانعة للتجلط. وتحفظ عينات الدم في الثلج حتى يتم إجراء عملية الطرد المركزي لها. وينبغي ألا تتأخر عملية الطرد المركزي عن نصف ساعة من جمع عينات الدم.

ويحصل الدم من الفئران بقص نهاية الطرفية للذيل أو بثقب القلب . ومن الأرانب والكلاب والقرود بثقب وريد الأذن بعد حلق الشعر من الأذن. وعند الاحتياج لكميات كبيرة من الدم من هذه الحيوانات فيفضل ثقب القلب. أما الطيور فيحصل على الدم منها بثقب أوردة الأجنحة.

 

3- إعداد البلازما:-

لإعداد البلازما تتبع الخطوات الآتية :-

                                 أ‌-         يستقبل الدم في أنابيب زجاجية بها مادة مانعة للتجلط.

                              ب‌-      تجري لها عملية طرد مركزي بسرعة 2500 دورة في الدقيقة لمدة خمس دقائق.

          ت‌-  تنقل البلازما وهي الجزء الرائق في الأنابيب التي استقبل بها الدم وأجرى لها طرد مركزي إلى أنابيب أخرى نظيفة. ويتم ذلك بماصة يركب فيها المؤخرة المطاطية لقطارة طبية.

 

4- إعداد المصل:-

لإعداد المصل تتبع الخطوات الآتية :-

أ‌-        يستقبل الدم في أنابيب زجاجية ليس بها مادة مانعة للتجلط.

ب‌-  يترك الدم بها لمدة 15 دقيقة في درجة حرارة الغرفة لكي يتجلط.

ت‌- يجمع المصل الرائق الذي فوقة التجلط مباشرة في أنابيب نظيفة.ومن الممكن أن تكسر الجلطة ميكانيكيا, ثم ترسب بعملية الطرد المركزي  2500 دورة في الدقيقة لمدة 10 دقائق, ويجمع المصل الرائق الذي فوق الجلطة المترسبة

 

5- تعيين تركيز ايون الهيدروجين للدم :-

يقاس تركيز ايون الهيدروجين للدم ( PH ) بواسطة جهاز PH ميتر PHtmeter.

 

6- السلوك الاسموزي لخلايا الدم الحمراء :-

تحاط خلايا الدم الحمراء,  شأنها شأن باقي خلايا الجسم بغشاء بلازمي plasma membrane . ويتحكم هنا الغشاء بما له من خاصية نفاذ اختيارية في دخول وخروج المواد المختلفة إلى ومن الخلية. فهو شديد النفاذية للماء،وقليل النفاذيه للجلوكوز ومنعدم النفاذيه لكل الايونات مثل الصوديوم والبوتاسيوم.

ويتغير سلوك خلايا الدم الحمراء في المحاليل المختلفة تبعا لخروج أو دخول الماء من والى هذه الخلايا. فكلما زاد الماء بالمحلول أي قل تركيز المذاب) دخل الماء إلى الخلايا فانتفخت. ويزداد انتفاخ الخلايا كلما زاد ماء المحلول وقل تركيز المذاب حتى يصل إلى درجة يزيد فيها الضغط الهيدروستاتيكي على جدران الخلايا. ولما كانت هذه الجدران غير مرنة فإنها تنفجر وتتحلل الخلايا وينطلق محتواها من  الهيموقلوبين . ويعرف هذا التحلل الدموي Hemolysis , ويحدث عند وضع خلايا الدم الحمراء في محلول مخفف جدا أو في ماء مقطر, ويسمى المحلول الذي يسبب هذا التحلل بالمحلول منخفض التوتر Hypotonic solution.وإذا وضعت خلايا الدم الحمراء في محلول عال التركيز فان الخلايا تفقد قدرا من الماء وتنكمش. ويعرف ذلك بالتسنن crenation. ويسمى المحلول الذي يحدث هذا التأثير بالمحلول عال التوتر Hypertonic Solutin  وبالطبع فأنة يوجد تركيز معين تظل عنده خلايا الدم الحمراء محافظة على أحجامها من التغير لان كمية الماء الخارج تساوي كمية الماء الداخل ويسمى المحلول عند هذا التركيز بالمحلول المتساوي التوتر Isotonic solutin  .ولاختبار السلوك الاسموزي لخلايا الدم الحمراء يلزم استخدام محلول مادة تكون أغشية الخلايا غير منفذة لها مثل كلوريد الصوديوم أو الجلوكوز لان أيونات الصوديوم والكلور وجزيئات الجلوكوز لا تنفذ من أغشية الخلايا بسهولة.

ويعتمد الضغط الاسموزي لأي محلول على عدد الايونات أو الجزيئات الذائبة فيه وليس على أحجامها لذا فإن الضغط الاسموزي لمحلول المادة ذات الوزن الجزئي العالي كالبروتين مثلا يكون اقل بكثير من الضغط الاسموزي لمحلول مادة ذات وزن جزئي منخفض بشرط تساوي تركيز المحلولين.

 

 

طريقة إجراء التجربة:-

1-  رقم أربعة أنابيب اختبار نظيفة بالأحرف ا , ب , ج , د وضع في كل منها ما يلي:

الأنبوبة (ا) 4 مل من الماء المقطر.

الأنبوبة (ب) 4 مل من محلول كلوريد الصوديوم ذي التركيز 0.6 %

الأنبوبة (ج)  4 مل من محلول كلوريد الصوديوم ذي التركيز 0.9 %

الأنبوبة (د)   4 مل من محلول كلوريد الصوديوم ذي التركيز    5 %

2-  أضف قطرة من دم غير متجلط إلى كل من الأنابيب المذكورة

3- خذ قطرة من كل أنبوبة بواسطة ماصة نظيفة وضعها على شريحة زجاجية نظيفة, افردها بواسطة شريحة أخرى.ثم افحصها تحت المجهر.

 

المشاهدة والاستنتاج:-

................................................................................................................................................................................................................................................................................................

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

الدرس العملي السابع :

 

فصائل الدم في الإنسان:- Human Blood GroPS

مقدمة:-

يتكون الدم من مكونين أساسيين هما:

1-  الخلايا: ( حمراء – بيضاء – صفائح )

2-  البلازما: وهي السائل التي تسبح فيه الخلايا ويمكن تقسية إلى :

!- الفبرنوجين ( Fibrinogen ) وهو البروتين الذي يقوم بوظيفة تجلط الدم.

!!- المصل ويحتوي على المكونات الأخرى للبلازما وتشمل الماء والبروتنات والجلوكوز والدهون والأحماض الأمينية والأملاح والإنزيمات والهرمونات والانتجينات Antigen والأجسام المضادة واليوريا.

إن عملية نقل الدم من إنسان لآخر لا تتم بصورة عشوائية وذلك لأنة في بعض الأحيان يؤدي الدم المنقول إلى الموت بمجرد انتهاء العملية. وذلك بان تتجمع خلايا الدم الحمراء للشخص نتيجة للتفاعل بين الانتجينات والأجسام المضادة.

والانتجين هو عبارة عن مادة أو جسم غريب يجد طريقة إلى دم الحيوان مما يستدعي إنتاج أجسام مضادة تقدم بمهمة التفاعل معه ويكون الجسم الغريب في العادة بروتينا أو يكون البروتين جزء منة على اقل تقدير. ويكون الجسم المضاد مختصا بدرجة عالية للانتجين ويطلق على الأجسام المضادة الناتجة من دخول االانتجينات إلى دم الحيوان بالأجسام المضادة المكتسية وذلك لان إنتاجها يعتمد أساسا على دخول هذه الانتجينات( الأجسام الغريبة ) . وتمثل هذه الأجسام المضادة أساس المناعة المكتسبة ضد كثير من الإمراض الوبائية وأيضا الأجسام المضادة يمكن أن تنتج بصورة طبيعية  ويطلق عليها في هذه الحالة  اسم الأجسام المضادة الطبيعية مثل الأجسام المضادة المصاحبة لفصائل الدم التي نحن الآن يصددها .

وكذلك الانتجينات يمكن أن توجد بصورة طبيعية كما في الانتجينات المصاحبة لفصائل الدم أيضا.

 

تعيين فصائل الدم في الانسان والعامل الرئيسي:-

يعتمد تعيين فصائل الدم في هذه التجربة على تفاعل المصول الضدية ( Anti-A  ) والمصل ضد B  (B-Anti ) والمصل ضد (Anti-D)Dفي أومايسمى Anti-Rh مع الانتيجينات (المستضدة) الموجودة علىسطح كريات الدم الحمراء الخاصة بدم الشخص المعني.

 

 

طريقة إجراء التجربة:-

1-  قسم شريحة زجاجية نظيفة إلى ثلاثة أجزاء

2- أضف قطرة من دم الشخص الذي يراد تعيين فصيلة دمة إلى كل جزء من الأجزاء الثلاثة في الشريحة.

3- ضع قطرة من الجسم المضاد A على الجزء الأول من الشريحة وقطرة من الجسم المضاد B على الجزء الثاني من الشريحة, وقطرة من الجسم المضاد لعامل الرئيس Anti - Rh على الجزء الثالث منها.

4- أمزج محتويات كل جزء من الشريحة جيداً وراقب حدوث الإلصاق في الدم على الأجزاء الثلاثة من الشريحة.

المشاهدة والاستنتاج:-

......................................................................................................................................................................................................................................................................................................

تمرين: -

1- أكمل الجدول الآتي :-

 

 

التفاعل مع المصل

فصيلة الدم

 

الانتجين

 

الجسم المضاد للمصل

فصيلة A

Anti-B

فصيلة B

Anti - A

فصيلة AB

 

فصيلة O

Anti-A+Anti-B

A

A

Anti - B

-

+

-

+

B

B

Anti - A

 

 

 

 

AB

AB

ـــــــ

 

 

 

 

O

ـــــــ

Anti-A+Anti -B

 

 

 

 

 

2-  على أي أساس تم تصنيف فصائل الدم في الانسان إلى ثمانية مجموعات ؟

3-  لماذا يعطي الشخص ذو الفصيلة O  نتيجة سلبية مع جميع الأضداد المستخدمة ؟

4- إذا تزوج رجل موجب العامل الرئيسي من امراءة سالبة العامل الرئيسي ماذا تتوقع أن يحدث لأبنائهم ؟

5-  ماهي الأهمية الطبية لمعرفة فصائل الدم في الإنسان؟

 

الدرس العملي الثامن

 

المعايير الهيماتولوجية :- Hematological Parameters

للدم عدة معايير هامة تعد قيمها ذات دلا لآت هامة ومؤشرات أساسية لسلامة الكائن الحي. وتمثل هذه المعايير كالأتي:-

1-  العدد الكلي لخلايا الدم الحمراء.

2-  العدد الكلي لخلايا الدم البيضاء.

3-  العدد النوعي لخلايا الدم البيضاء.

4-  كمية الهيموقلوبين.

5-  قيمة الهيماتوكريت.

6-  معدل ترسيب خلايا الدم الحمراء وزمن التجلط.

 

تعيين التركيز العددي لخلايا الدم الحمراء: Red Blood Cellor Erythro Cyte Couts

 

هدف التجربة:-

تعيين عدد كريات الدم الحمراء في عينة دم مأخوذة من الإنسان باستخدام الهيموسيتوميترHaemocytometer .

 

مبدأ التجربة:

تعتمد التجربة على تخفيف الدم بسائل تخفيف كريات الدم الحمراء ( محلول متساوي التوتر من كلوريد الصوديوم ) واخذ عينة بحجم معين لتعد في حجيرة العد الهيموسيتو متر ) بواسطة المجهر الضوئي.

 

تمهيد:-

لعد خلايا الدم الحمراء تستخدم ماصة خاصة وشريحة زجاجية مدرجة تسمى الهيموسيتومتر .

 

وصف الماصة:-

الماصة مدرجة بعلا متين سفلية 0.5 وعلوية .101 ويمثل الرقمان حجم الفراغ داخل الماصة بالمليمترات المكعبة وقبل العلامة العلوية يوجد انتفاخ في الماصة به خـرزة ذات لون احمر تستخدم  لتقليب .

 

وصف الهيمو سيتو متر:-

عبارة عن شريحة زجاجية سميكة يوجد على مسرحها الوسطي 25. كل مربع منها مقسم 16 مربع أصغر.طول المربع الصغير يساوي   1 /0 2 ملم . وهو محفور بعمق 1 / 10 ملم .لذا يكون حجمه1 /20 * 1 / 20 * 1 / 10 = 1 / 4000ملم3.

 

1- يحضر محلول متساوي التوتر لتخفيف الدم , وهو عبارة عن كلوريد الصوديوم مذاب في ماء مقطر .

2- اسحب بواسطة الماصة دم غير متجلط حتى علامة 0.5  ثم اكمل بالمحلول المتساوي التوتر حتى علامة 101. ثم اغلق نهايتي الماصة بواسطة الإبهام والسبابة ورج الماصة لمزج الدم بالمحلول المتساوي التوتر .

3- تخلص من بضع قطرات من الدم المخفف عبر الفتحة السفلية للماصة بعد ذلك ضع قطرة من الدم المخفف عند حافة الغطاء الزجاجي الموضوع على الشريحة . لاحظ أن قطرة الدم ستنتثر بالخاصية الشعرية ما بين الغطاء الزجاجي والشريحة . اترك الشريحة لمدة دقيقة لكي تترسب خلايا الدم الحمراء ثم ضعها تحت المجهر لكي تفحص .

4- إبداء الفحص بالقوة الصغرى لمعرفة توزيع خلايا الدم الحمراء لأنة  ينبغي أن يكون التوزيع متجانسا وبلا تجمع , فان وجد تجمع نضف الشريحة وضع قطرة جديدة. وإذا تكرر وجود التجمع فهذا يعني أن الدم  لم يسحب بالطريقة الصحيحة ولم يخفف كما ينبغي . وفي هذه  الحالة يجب إعادة التخفيف.

5- ولعد خلايا الدم الحمراء استخدم العدسة الكبرى . ويتم العدد في خمسة مربعات كبيرة تقع على أحد قطري المربع. لاحظ أن كل مربع كبير يحتوي على 16 مربع صغير , أي يجري العد في 80 مربع صغير .

يجب مراعاة أن لا تزيد الفروق بين أعداد خلايا الدم  الحمراء في المربعات الخمسة الكبيرة عن 10%زيادة أو نقصانا وإلا كان توزيع الخلايا غير متجانس.

طريقة إجراء التجربة:-

 

طريقة الحساب :-

·       عدد خلايا الدم الحمراء في 80 مربع صغير = س

·       حجم المربع الصغير 1 / 20 * 1 / 20 * 1 / 10 = 1 / 4000

·       التخفيف   1 : 200

.: عدد خلايا الدم الحمراء في ملم 3 من الدم =  س / 80 * 4000 * 200 خلية  دم حمراء / ملم3 من الدم.

 

أو بطريقة أخرى : -

س ( عدد من  خلايا الدم الحمراء في 80 مربع صغير )     80* 1 / 4000 ملم3

ص ( عدد خلايا الدم الحمراء في 1 ملم3 )        1 ملم3

ص= س * 1 ÷80 * 1 / 4000 = س * 4000 / 80

وبما أن التخفيف 200 مرة فان :

ص = س / 80 * 4000 * 200 خلية دم حمراء / ملم3 من الدم

 

مثال : -

إذا كان مجموع عدد الخلايا المعدودة في المربعات الخمسة مساوياً لـ 450 فان عدد كريات الدم الحمراء في المليمتر المكعب الواحد من الدم غير المخفف= 450 / 80 * 4000 * 200  =  4.5  *  610

النتـائج : -

قارن نتيجتك مع نتائج المدى الطبيعي للفئات المبينة أناة .

 

الفئة

عدد كريات الدم الحمراء في المليمتر المكعب الواحد

الرجال

4.5 – 6.5 * 610

النساء

4   5.5 * 610

الأطفال ( 4 سنوات )

4.2 –  5.2 * 610

الرضع  ( 1 – 6 اشهر )

3.8 –  5.2 *610

حديثي الولادة

5 –  6 *610

 
 
أسئلة :-

 

1-  لماذا يخفف الدم قبل البدء بعد كريات الدم الحمراء ؟

2-  لماذا تترك حجيره العدد الهيمو سيتوميتر لمدة دقيقتان بعد ملئها بالدم المخفف ؟

3-  هل تعد هذه الطريقة من الطرق الدقيقة لعد كريات الدم الحمراء ؟

4-  علل: استخدام محلول متساوي التوتر في تخفيف الدم ؟

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

الدرس العلمي التاسع

 

تعيين التركيز العددي لخلايا الدم البيضاء :-

 

هدف التجربة :-

تعيين عدد كريات الدم البيضاء  في عينة دم مأخوذة من الإنسان باستخدام ( الهيموسيتوميتر )

 

مبدأ التجربة :-

تعتمد التجربة على تخفيف الدم بالسائل الخاص بتخفيف كريات الدم البيضاء الذي يحلل كريات الدم الحمراء تاركا كريات الدم البيضاء سالمة . وتعد كريات الدم البيضاء باستخدام ( الهيمو سيتوميتر )تحت المجهر .

ولكن هنا تستخدم ماصة تختلف مقاييسها عن تلك التي استخدمت لعد خلايا الدم الحمراء . إذ أن تدريجها عبارة عن علامتين,سفلية 0.5وعلوية 11  وقبيل العلامة العلوية يوجد انتفاخ  في الماصة في خرزة ذات لون ابيض تستخدم لمزج الدم بالمحلول المخفف. والمحلول المخفف هنا عبارة عن محلول مركب من جزيئين ( أ ) و ( ب ) ويسميا محلول شاو ( أ ) و ( ب ) وأيضا يمكن استخدام محلول ترك تخفيف الدم .

 

طريقة إجراء التجربة:-

1-  حضر محلول تخفيف الدم شاو ( أ ) و ( ب ) أو ترك.

2- اسحب بواسطة الماصة دم غير متجلط حتى علامة 0.5ثم اكمل بمحلول التخفيف حتى علامة 11  ثم افرك الماصة عند الانتفاخ   بين راحتي اليدين لمزج  الدم بمحلول التخفيف.

3-  اتبع نفس الخطوة السابقة  رقم (3) لعد خلايا الدم الحمراء.

4- اتبع نفس الخطوة رقم (4) التي اتبعت لعد خلايا الدم الحمراء إلا أن العد هنا ينبغي أن يكون بواسطة العدسة الصغرى فقط .

 

الحسابات

التخفيف 1 : 20 , حجم المربع الصغير 1 / 4

افترض إن عدد خلايا الدم البيضاء في 80 مربع صغير = س

عدد خلايا الدم البيضاء في ملم3 من الدم = س / 80 * 4000 * 20 خلية دم بيضاء / ملم3 .

 

قارن النتيجة المتحصل عليها مع نتائج المدى الطبيعي المبينة في الجدول أدنا :

 

الفئة

عدد الكريات البيضاء في ملم3

الرجال والنساء

4000  ـــــ  10000

الأطفال (10سنوات)

4000  ـــــ  10000

الأطفال (3سنوات)

4000  ـــــ  11000

الرضع(3-9 شهور)

4000  ـــــ  15000

حديثي الولادة

1000  ـــــ  20000

 

 

أسئلة :-

1-  اذكر مبدأ تجربة تعيين التركيز العددي لخلايا الدم البيضاء

2-  ما هو الفرق بين طريقة عد خلايا الدم الحمراء والبيضاء ؟

3-  علل لما يأتي-

أ‌-  لعد خلايا الدم الحمراء يخفف الدم بمعدل 1 : 200 بينما لعد خلايا الدم البيضاء يخفف بمعدل 1 :20 .

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

الدرس العملي العاشر

 

العدد النوعي لخلايا الدم البيضاء:-

في هذه الطريقة يتم تقدير النسبة المئوية لأنواع خلايا الدم البيضاء وهي :

1- الخلايا اللمفية                 Lymphocytio

2- وحيدة النواة Monocytio

3-  المتعادلة Neutrophils

4- المحبة للحامض Eosinophils

5- والمحبة للقاعدة Basophils

وتعد لذلك مسحات من الدم ( Blood film )على شرائح زجاجية تصبغ بصيغة خاصة تظهر خلايا الدم البيضاء بوضوح , والصيغة هي صيغة جيمسا s stain Giemsa .

 

طريقة إجراء التجربة:-

1- حضر محلول منظم  بإذابة 0.01 جرام من ملح منظم Butter  في 10 مل ماء مقطر . ويجب مضاعفة هذه الكميات , ثم توضع في وعاء صيغ الشرائح .

2-  حضر صيغة جيمسا كالآتي :

يضاف 9 مل من المحلول المنظم المحضر في الخطوة السابقة إلى 1 مل          من صيغة جيمسا. وتوضع في وعاء صبغ الشرائح .

3- ضع قطرة من دم غير متجلط على شريحة نظيفة تماما  ثم افردها بواسطة شريحة اخرى نظيفة , ثم اتركها لتجف في الهواء

4-  ثبت الشرائح بوضعها في كحول الميثانول لمدة دقيقتان ثم أخرجها واتركها لتجف مرة أخري.

5-  ضع الشرائح في صبغة جيمسا لمدة تتراوح من 1 – 5 دقائق .

6- اغسل الشرائح عدة مرات بواسطة المحلول المنظم ثم اتركها لتجف وبذلك تكون جاهزة للفحص والعد.

7- صمم جدول بأنواع خلايا الدم البيضاء واعدادها في عشر مرات مختلفة.ثم احسب المتوسطة لأعداد كل نوع منها.

8- افحص الشرائح المجهزة للعد بواسطة الميكرو سكوب تحت العدسة ذات القوى الكبرى , ويستحسن أن تختار من كل شريحة جهزت افضل جزء فيها وعلم المجال الميكروسكوب بخليتي دم بيضاويتين إحداهما على اليمين والأخرى على اليسار . ثم ابدأ العد لكل نوع من خلايا الدم البيضاء ودونه في الجدول المصمم. ثم اضبط مجالا ميكروسكوبيا ثانيا بتحريك الشريحة يمينا أو يسارا . ثم مجالا ثالثا وهكذا. ثم أحسب متوسط أعداد الخلايا البيضاء كل نوع منها بقسمة مجموع الخلايا البيضاء في كل نوع على 10 ( عدد مرات الفحص ).ثم أحسب النسبة المئوية لعدد كل نوع من خلايا الدم البيضاء بالنسبة للمجموع الكلي لها.

 

Basophils

محبة للقاعدة

Eosinophils

محبة للحامض

Neutrophils

المتعادلة

Monocytio

وحيدة النواة

Lymphocytio

اللمفية

 

 

 

 

 

 

1

 

 

 

 

 

2

 

 

 

 

 

3

 

 

 

 

 

4

 

 

 

 

 

5

 

 

 

 

 

6

 

 

 

 

 

7

 

 

 

 

 

8

 

 

 

 

 

9

 

 

 

 

 

10

 
 
النتـــــــــــــائج :-

 

................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................

 

 

 

 

 

 

الدرس العملي الحادي عشر

 

 

تقدير الهيموقلوبين باستخدام طريقة سهلى:-

تعتبر كمية الهيموقلوبين إلى حد ما دلالة على عدد خلايا الدم الحمراء . ولتـعيين كمية الهــيموقلوبين  توجــد عدة طرق ابسطهــا وأسرعها طريقة سهلى . ويمكن تقدير الهيموقلوبين  بدرجة عــالية من الدقة بطريقة التحليل اللوني ويسمى جهاز سهلى بقياس الهيموقلوبين Hemoglobinometer  .

ويطلق علية اختصاراً هيمو ميتر Hemometer .

 

الهدف من التجربة :-

تقدير الهيموقلوبين في الدم باستخدام طريقة سهلى .

 

مبداء التجربة :-

تعتمد هذه التجربة على تفاعل الهيموقلوبين مع حامض الهيدروكلوريد المخفف ليتكون مركب ذو لون بني يسمى الهيماتين الحامضي Acid Hematin

 

طريقة إجراء التجربة:-

1- ضع كمية من حامض الهيدروكلوريك (0.1 عياري ) في الأنبوبة المدرجة حتى العلامة 30.

2- عقم إصبعك بواسطة مسحة طبية وبواسطة إبرة وخز جديدة ( Boold Lancit ) أوخز وخزة قوية وسريعة بحيث تخرج قطرة دم كبيرة الحجم . ثم اسحب بالماصة قطرة الدم حتى العلامة 20 , ثم انقل الدم على الفور إلى الأنبوبة المدرجة المحتوية  على حامض الهيدروكلوريك ثم اسحب كمية من حامض الهيدروكلورك إلى داخل الماصة لفسلها وكرر ذلك عدة مرات.

3- أضف حامض الهيدروكلوريك على شكل  قطرات مع المزج بواسطة القضيب الزجاجي حتى يتكون لون بني ثابت نتيجة لتحول الهيموقلوبين إلى الهيماتين الحامضي.  واستمر في إضافة حامض الهيدروكلوريك مع مقارنة لون الهيماتين الحامضي باللون القياسي في علبة المقارنة . والى أن يتساوى اللونان ] يستحسن عمل هذه في خطوة النافذة  [

4-   ترك المخلوط لمدة دقيقة بعــد إضــافة أخر قطــرة تعـــادل عندها اللونان بعدئذ  أضف قطرة أخرى من حامض الهيدروكلوريك فتلاحظ أن لون المحلول صار افتح  قليلا من اللون القياسي في علبة المقارنة ثم خذ متوسط القراءتين كنتيجة نهائية .

 
الأسئلة :-

 

1-  هل تعد طريقة سهلى لتقدير الهيموقلوبين من الطرق الدقيقة ؟ ولماذا؟

2-  ما هي مزايا استخدام هذه الطريقة ؟

3-  علل لما يأتي :

أ- استخدام حمض الهيدروكلوريك في تخفيف الدم ؟

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

الدرس العملي الثاني عشر

 

تعيين قيمة الهيماتوكريت:-
Hematoerit volue ( Ht ) or packed cell volume ( PCV)

 

تعبر قيمة الهيماتوكريت عن النسبة بين حجم خلايا الدم الحمراء وحجم البلازما. وتقدر كنسبة مئوية أي تضرب * 100. وتبلغ قيمة الهيما توكريت في الرجل السليم 45% وفي المراءة السليمة 40% .

وتــدل قيمــة الهيمـاتوكريت مثلها مثل كمية الهيموقلوبين على عـــدد خلايا الدم الحمراء إلا قيمة الهيماتوكريت هي الأكثر دقه فانخفاض قيمة الهيماتوكريت تعني نقص عدد خلايا الدم الحمراء و   ومــن ثــم حــدوث الأنيـــميا. وكــذلك تعني زيــادة مــاء الجسمOver Hydration أيضا.  وبالعكس فزيادة قيمة الهيماتوكريت تعني حدوث الجفاف أو فقدان سوائل الجسمية Dehydration.

 

طريقة إجراء التجربة:-

1- خذ عدد من أنابيب الهيماتوكريت وضع بها قليلا من مانع التجلط إذا لم يكن الدم ممنوعا من التجلط سابقا ثم ضع الدم بكل أنبوبة من أحد طرفيها.

2- ضع الأنابيب في جهاز الطرد المركزي بسرعة 2500 دورة في الدقيقة لمدة عشرين دقيقة . لاحظ بعد توقف الجهاز أن خلايا الدم الحمراء تكون طبقة سميكة في النصف الأسفل من الأنبوبة بينما تكون البلازما طبقة سميكة أخرى فوق خلايا الدم الحمراء وبين الطبقتين توجد طبقة رقيقة رمادية اللون تتكون من خلايا الدم البيضاء والصفيحات الدموية.

3- ضع كل أنبوبة أفقيا على مقياس الهيماتوكريت الموجود فوق غطاء جهاز الطرد المركزي بحيث تكون بين الحدين صفر و100 . ثم أقرا نسبة خلايا الدم الحمراء إلى عمود الدم الكلي مباشرة من التقسيمات الموجودة على غطاء جهاز الطرد المركزي .

 

 

تعيين معدل ترسيب خلايا الدم الحمراء :-

 

Erythrocyte Sedimentation Rate ( RSR )

يصير معدل ترسيب خلايا الدم الحمراء عن سمك طبقة البلازما الرائقة( بالمليمترات ) فوق خلايا الدم الحمراء المترسبة عند نهاية ساعة وعند نهاية ساعتين . لذا يصير عنة بوحدة مليمتر / ساعة ومليمتر / ساعتين . ويعني هذا أنة كلما قل عدد خلايا الدم الحمراء زاد معدل الترسيب. ويعتمد معدل الترسيب خلايا الدم الحمراء على تركيز بعض البروتينات في البلازما خاصة الفيرونوجين والفا وجاما جلوبين ونظرا لان هذه البروتينات تزيد عند وجود التهابات لذا فان  معدل ترسيب خلايا الدم الحمراء يزيد في مثل  هذه الحالة .

 

طريقة إجراء التجربة:-

تستخدم طريقة   ويستر غرينWestregren Methad لتقدير معدل ترسيب خلايا الدم الحمراء.املأ الأنبوبة بدم غير متجلط  ثبتها في وضعها الراسي على حامل وسترغرين ثم قس سمك طبقة البلازما ( بالمليمترات ) في نهاية ساعة ثم في نهاية ساعتين .

 

 

المشاهدة والاستنتاج:-

................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

الدرس العملي الثالث عشر

 

الكشف عن المكونات الطبيعية للبول :-

1-  الكلور :-

 بوجود الكلور في البول بصورة أساسية على هيئة كالوريد الصوديوم . وتزداد كميتة عند تناول الأغذية الغنية بالملح ويتم الكشف عنة باستخدام تفاعل أيونات الكلور يد مع نترات الفضة  كلون راسبا ابيض هو كالوريد الفضة الذي يصبح لونه غامضا بفعل الضوء بعد فترة من الزمن.

 

المواد المطلوبة :-

- بول حديث – محلول نترات الفضة 1%

- محلول حامض النتريك 10%

 

طريقة إجراء التجربة:-

خذ 2 مل من البول في أنبوبة اختبار أضف إليها 1/2 مل من محلول نترات الفضة و 5 قطرات من حامض النتريك 10 % .

 

المشاهدة والاستنتاج:-

................................................................................................................................................................................................

 

2-الكبريتات :-

 مصدر أيونات الكبريتات في البول هو الأحماض الأمينية الكبريتية التي تتأكسد في الجسم لتكون هذه الأيونات في النهاية .وتعتمد كمية الكبريتات في البول على تفكك البر وتينات النسيجية وتناول اللحوم . ويتم الكشف عن هذه الأيونات بتفاعلها مع كالوريد  الباريوم معطية راسب ابيض من كبريتا ت الباريوم لا يذوب في الأحماض  ولا القلويات.

 

المواد المطلوبة :-

بول حديث – محلول كالوريد الباريوم 5 %

 

 

طريقة إجراء التجربة:-

ضع 2 مل من البول في أنبوبة اختبار ثم أضف إليها 1/2 مل من محلول كلوريد الباريوم

 

المشاهدة والاستنتاج:-

................................................................................................................................................................................................

 

3-الفوسفات Phoshate :

 مصدر الفوسفات في البول قد يكون الغذاء أو تفكك المركبات العضوية المحتوية على فسفور مثل اللبيدات الفسفورية والبر وتينات الفسفورية والبر وتينات النووية . كما أن أنسجة الجسم تحتوي على إنزيم الفوسفاتيز الذي يعمل على نزع الفوسفات من المركبات العضوية وتزداد كمية الفوسفات في حاله الإجهاد العضلي ويتم الكشف عن الفوسفات باستخدام مولبيدات الأمونيوم في وسط حاضي حيث يتفاعل  حامض الفسفوريك  مؤديا إلى ظهور راسب اصفر هو فوستومولبيدات الأمونيوم الذي لا يذوب في حامض النتريك بينما يذوب في هيدروكسيد الامونيوم.

 

المواد المطلوبة :-

بول حديث – كاشف مولبيدات الأمونيوم ( يحضر بإذابة 7.5 جم من ملح مولبيدات الأمونيوم في 100مل ماء ثم يضاف إليها 100 مل من حاض النتريك 32% ).

 

طريقة إجراء التجربة:-

ضع 2 مل من كاشف مولبيدات الأمونيوم في أنبوبة اختبار وسخنها حتى الغليان ثم أضف بعد ذلك  بعض قطرات من البول.

 

المشاهدة والاستنتاج:-

..................................................................................................................................................................................................

 

 

 

 

 

الكشف عن المكونات المرضية في البول:-

 

أ- البر وتينات Protiens:

في الحالة الطبيعية توجد البر وتينات بقدر ضئيل جدا لا يمكن قياسه لكن في حالة التهاب الكليتين يظهر الألبومين في البول وفي حالة الأورام الخبيثة في العظام تظهر بعض البر وتينات الأخرى . ويتم الكشف عن وجود البروتينان في البول بنفس الطرق التي ذكرت من قبل في  اختبار البروتين.

 

ب- الجلوكوز Glucose:

يظهر الجلوكوز في البول في حالة الإصابة بمرض السكر ويتم  الكشف عن وجوده في البول بنفس الطرق التي ذكرت في اختبارات الكربوهيدرات .

King   Saud University. All rights reserved, 2007 | Disclaimer | CiteSeerx